www.solen.cz 16 SOLEN Tab. 2. Přehled podmínek centrifugace pro získání plazmy chudé na destičky Tipy a triky v preanalytice (Sarstedt) Praktická hematologie (doc. Pecka) CLSI (Guideline) Příbalový leták Pathromtin Tíhové zrychlení g 1 800 × g (1 800–2 300 × g) 2 000–2 500 × g 1 500 × g 1 500 × g Doba centrifugace (minuty) 10 15 15 10 Teplota (°C) 18–25 20–25 18–25 18–25 5.2.2 Plazma bohatá na destičky Plazma bohatá na obsah krevních destiček (Platelet rich plasma – PRP) se používá v koagulační laboratoři zejmé‑ na pro stanovení funkčnosti krevních destiček optickou agregometrií. Doporučuje se citrátovou plnou krev cen‑ trifugovat bez chlazení při laboratorní teplotě 15 minut při 250 × g. Počet krevních destiček v PRP by se měl pohybovat nad 100 × 109/l. 5.2.3 Bezdestičková plazma Bezdestičková plazma se většinou používá pro vyšetřo‑ vání speciálních koagulací, např. vyšetřování protilátek typu lupus antikoagulans (LA), rezistence k aktivovanému proteinu C (APC‑R) atd. K získání této plazmy se provádí dvojnásobná centrifugace citrátové plné krve. Nejprve se centrifuguje primární zkumavka obvykle 15 minut při 3000 × g. Následně se plazma přepipetuje do čisté suché zkumavky a znovu centrifuguje 15 minut při 3000 × g. Takto se bezdestičková plazma přepipetuje do nádobky/ kepu k zamrazení, nebo se přímo analyzuje. Při pipetáži je nutné dávat pozor na krevní elementy, které se mohou vyskytovat na dně sekundární zkumavky. 6 Zamrazení vzorků Zmraženou plazmu pro hemokoagulační vyšetření se doporučuje skladovat až po dobu 1 roku při teplotě nižší než -70 °C, popř. při teplotě -20 °C pouze 2 týdny. Před vyšetřením se plazma rozmrazí během 5–10 minut při teplotě +37 °C ve vodní lázni a šetrně se v ruce promíchá. Jednou rozmražená plazma se nesmí znovu zamrazit. Tím by došlo k degradaci některých labilních koagulačních faktorů a získání nevalidních výsledků. Vzorky pro vyšetřování primární hemostázy se nesmí zamrazit vůbec. 7 Skladování a stabilita vzorků Stabilitou vzorku se rozumí doba, po kterou je vzorek stabilní a do kdy musí být doručen do laboratoře a zde vyšetřen. Primární vzorek musí být během této doby transportován a skladován tak, aby nedocházelo k jeho traumatizaci, např. silnými otřesy, třepáním, ale také vy‑ stavením přímému slunečnímu záření či mrazu. Skladování vzorků citrátové krve před vyšetřením hemostázy nebo zpracováním musí být při teplotě +15 až +25 °C. Nevhodné je skladování v chladu při +2 až +8 °C, protože může způsobit aktivaci krevních destiček, aktivaci FVII, pokles aktivity vWF a FVIII. To může vést k falešnému podezření na diagnózu hemofilie A nebo von Willebrandovy choroby. Doporučuje se skladovat čerstvou plazmu při teplotě +15 až +25 °C pouze po dobu stability vyšetřovaných parametrů. Z plné krve se provádějí vyšetření hemostázy na pří‑ strojích PFA-100, PFA-200, ROTEM, TEG, Multiplate, a sice zpravidla do 2 hodin od okamžiku odběru. Separaci plazmy pro koagulační vyšetření je nutné provést do 2 hodin od odběru a většina hemokoagu‑ lačních vyšetření se musí provést nejdéle do 4 hodin od odběru (výjimkou je FVIII nebo PT). Plazma chudá či bohatá na destičky pro optickou agregometrii (PPP, PRP) se musí vyšetřit do 2 hodin od okamžiku odběru krve, suspenzi destiček nelze déle skla‑ dovat ani zamrazit. U protrombinového testu (PT) je doporučena stabilita primárního vzorku i plazmy 6 hodin. Teplota skladování nesmí klesnout pod +15 °C. Při ochlazení se aktivuje FVII a dochází ke zkrácení času PT. U aktivovaného parciálního tromboplastinového testu (APTT) je stabilita primárního vzorku i plazmy bez heparinu 4 hodiny od okamžiku odběru. Vzorek pacienta léčeného nefrakcionovaným heparinem se musí centrifu‑ govat do 1 hodiny po odběru. Není‑li na žádance uveden druh antikoagulační léčby, laboratoř posuzuje stabilitu vzorku jako by byl pacient heparinizován. U faktoru VIII (FVIII) je stabilita primárního vzorku i plazmy 2 hodiny od okamžiku odběru.
RkJQdWJsaXNoZXIy NDA4Mjc=